菌种名称(cheng)：白色念珠菌 菌(jun)种(zhong)编(bian)号：(CMCC(F)98001)    

一、目(mu)的：确保(bao)菌株的质量，对实验室的标准(zhun)菌株进行合理的保(bao)存，方便(bian)管理和使用。

二、标准菌株复苏及增菌

用75%酒精(jing)浸泡(pao)过(guo)的(de)脱脂棉擦净安瓿(bu)(bu)管(guan)(guan)，将冻(dong)干(gan)管(guan)(guan)尖端放在(zai)酒精(jing)灯火(huo)焰上(shang)加热，用消毒后(hou)(hou)的(de)剪(jian)刀取下(xia)(xia)(xia)外部瓶盖，并(bing)将冻(dong)干(gan)管(guan)(guan)开口处在(zai)酒精(jing)灯火(huo)焰上(shang)加热灭(mie)菌(jun)，并(bing)保持在(zai)火(huo)焰旁操作。用无(wu)菌(jun)吸管(guan)(guan)吸取0.1mL~0.2mL复苏(su)液，滴入管(guan)(guan)内，待安瓿(bu)(bu)管(guan)(guan)内的(de)牛奶菌(jun)粉(fen)溶解，再(zai)用无(wu)菌(jun)吸管(guan)(guan)，吸取全部菌(jun)悬液接在(zai)1~2支装有5mL沙氏液体培(pei)(pei)养(yang)基(ji)试管(guan)(guan)后(hou)(hou)，在(zai)28.0℃下(xia)(xia)(xia)培(pei)(pei)养(yang)18h～24h。（经过(guo)冷冻(dong)干(gan)燥保存后(hou)(hou)，复苏(su)时(shi)间(jian)较长，可适当延长培(pei)(pei)养(yang)时(shi)间(jian)。观察(cha)液体培(pei)(pei)养(yang)基(ji)有浑浊(zhuo)现象再(zai)进行下(xia)(xia)(xia)一步。

三、鉴别培(pei)养

用(yong)灭菌后的(de)接种环取(qu)适量的(de)上述沙氏(shi)液(ye)体培养(yang)基(ji)菌悬(xuan)液(ye)划线接种于沙氏(shi)琼脂(zhi)培养(yang)基(ji)平皿，在28.0℃下培(pei)养 72h，观察菌落形(xing)态。应(ying)为圆形(xing)或卵圆形(xing)，灰白色。

菌株保藏

1、瓷珠(zhu)冻存管保(bao)藏法(fa)

操(cao)作(zuo)步骤：在无(wu)菌条件下，用(yong)75%酒精(jing)浸(jin)泡过的(de)脱(tuo)脂棉(mian)擦净(jing)冻存管表面并让其自然(ran)风干，打开冻存管的(de)螺旋瓶盖，用(yong)灭菌的(de)接种环挑取适量经鉴别(bie)培养后(hou)的新鲜(xian)纯(chun)菌(jun)(jun)培(pei)养物，放入冻(dong)存液中(zhong)；拧紧瓶盖，来回颠倒使菌(jun)(jun)体(ti)乳化为混浊(zhuo)(zhuo)的(de)(de)(de)菌(jun)(jun)悬浊(zhuo)(zhuo)液，此时菌(jun)(jun)悬浊(zhuo)(zhuo)液会吸附在小瓷珠内外表(biao)面；用无菌(jun)(jun)移液管将冻(dong)存管中(zhong)多余的(de)(de)(de)菌(jun)(jun)悬浊(zhuo)(zhuo)液尽量吸出(chu)（吸出(chu)的(de)(de)(de)菌(jun)(jun)悬浊(zhuo)(zhuo)液应放入75%酒精消毒(du)液中(zhong)并随后进行高压灭菌(jun)处理(li)）；拧紧瓶盖制备成标准储备菌(jun)株冻(dong)存管(guan)(guan)并贴上相(xiang)应的详细标签，并做好相(xiang)关(guan)菌(jun)种记录，将冻(dong)存管(guan)(guan)置于-20℃冰箱中(zhong)密封(feng)上锁保存。（-20℃可保存一(yi)年）。

冻(dong)存(cun)管(guan)的使用(yong)：取(qu)出(chu)冻(dong)存(cun)管(guan)并用(yong)力摇晃(huang)，使瓷(ci)(ci)珠均匀分(fen)散在管(guan)内；无菌(jun)(jun)(jun)条件下拧开冻(dong)存(cun)管(guan)，用(yong)无菌(jun)(jun)(jun)镊子取(qu)出(chu)一颗(ke)小(xiao)瓷(ci)(ci)珠（小(xiao)瓷(ci)(ci)珠从冻(dong)存(cun)管(guan)取(qu)出(chu)后不得(de)放(fang)回(hui)），拧紧瓶盖；尽可能快(kuai)的将冻(dong)存(cun)管(guan)放(fang)回(hui)原来的保存(cun)环境(jing)（温度(du)过(guo)多的改变会(hui)降(jiang)低菌(jun)(jun)(jun)体的生存(cun)能力），将小(xiao)瓷(ci)(ci)珠直(zhi)接(jie)接(jie)种于适合的沙氏液体培养基(ji)。

2、斜面低温保(bao)藏法

无(wu)(wu)菌(jun)(jun)条(tiao)件下，将标准菌(jun)(jun)株菌(jun)(jun)悬浊(zhuo)液，以无(wu)(wu)菌(jun)(jun)操作接种在10mL沙氏固体(ti)斜面培(pei)养基上，置于相应温度的(de)培(pei)养箱中(zhong)培(pei)养，待菌(jun)充分(fen)生长(zhang)后(hou)，将砂芯硅胶(jiao)塞(sai)部分(fen)用牛皮纸包扎好后(hou)，移至2~8℃的(de)冰(bing)箱中(zhong)保存，定期(qi)转种，转种频率为一月一次。

此保存方法方便平时实验对标准(zhun)菌种(zhong)的取用(yong)。

五(wu)、菌种的使用

购(gou)进的标准菌株，冻干粉末于2℃~8℃保藏，开启复(fu)活(huo)分离后菌株(zhu)以及其他须保管的(de)菌株(zhu)应填(tian)写菌株(zhu)使(shi)用记录表，记录菌种名称、编(bian)号、来源、复(fu)活(huo)分离时间(jian)、传(chuan)代数、保管条(tiao)件(jian)、保管时间(jian)等。

废(fei)弃(qi)的(de)菌种(zhong)、盛(sheng)放的(de)容器及(ji)其它使用的(de)废(fei)弃(qi)物需经高温消(xiao)毒灭菌处理（121℃ 30min）后方(fang)可(ke)丢弃，实(shi)(shi)验完后的工作台及(ji)(ji)实(shi)(shi)验室设(she)备设(she)施及(ji)(ji)时进行酒精消毒处理或(huo)紫外灯灭(mie)菌处理，填写相(xiang)关仪(yi)器设(she)备使用消毒记录，以便追溯，严防污染。

（检验分析中心）